Caractérisation des gènes UDP-Glycosyl transférase chez le principal vecteur du paludisme, Anopheles funestus et leur potentiel contribution à la résistance aux Pyréthrinoïdes au Cameroun Mémoire

Abstract

La prévention du paludisme repose en grande partie sur la lutte contre les vecteurs. Cependant, la résistance aux insecticides des vecteurs du paludisme menace le contrôle et l'élimination de cette maladie dans de nombreux pays endémiques, dont le Cameroun. Cette résistance est médiée par plusieurs familles d'enzymes chez certaines espèces, toutefois la classe des UDP-Glycosyl transférases reste peu étudiée. Le but de cette étude était de déterminer le profil de résistance aux pyréthrinoïdes et d’évaluer l'implication possible des UDP-Glycosyl transférases dans cette résistance chez Anopheles funestus s.l. Après identification morphologique et moléculaire des adultes (F0) collectés à Mibellon et élevés à l'insectarium, des tests de sensibilité aux insecticides ont été réalisés sur les moustiques adultes F1 selon le protocole de l'OMS. A la fin des tests, les survivants de l'exposition à la Deltaméthrine et à la Perméthrine ont été analysés pour détecter les mécanismes de résistance à ces insecticides. Le niveau d'expression des gènes candidats de l'UDP-Glycosyl transférases identifiées par RNASeq 2018 pouvant être impliqués dans la résistance aux insecticides a été évalué par PCR quantitative (RT-qPCR). Enfin, la recherche des mécanismes de résistance aux pyréthrinoïdes a été réalisée par amplification, clonage, séquençage et étude du polymorphisme du gène AFUN004354. Les résultats des tests de sensibilité ont révélé que cette population était résistante, avec les taux de mortalité sur 24 heures suivants : Deltaméthrine 0,05% : 19,44 ± 2,78 %, Deltaméthrine 0,25 % : 53,68 ± 8,22 %, Deltaméthrine 0,5 % : 89,75 ± 2,25 %, et Perméthrine 0,75 % : 20,47 ± 6,86 %, Perméthrine 3,75% : 68,34 ± 2,62 %, Perméthrine 7,5 % : 83.41 ± 4.25 %. Le gène Afun004354 a été plus surexprimé chez Fumoz avec 23,21 ± 0,65 de taux d'expression que chez les souches de terrain : Control avec 4,83 ± 0,93, Deltaméthrine 1X vivant avec 5,79 ± 4,87 et Perméthrine 1X vivant avec 10,39 ± 0,26 de taux d'expression et l'étude du polymorphisme de ce dernier a montré une grande diversité génétique entre les souches de laboratoire et les souches de terrain. Cependant, les valeurs non significatives de Tajima et Fu et Li (D et D*) obtenues suggèrent que les changements observés dans ce gène peuvent être dus au hasard et que le rapport Ka/Ks avec des valeurs inférieures à 1 rreflète une sélection purificatrice ou stabilisatrice (agissant contre les changements). Des études complémentaires sont nécessaires pour élucider cette surexpression induite du gène Afun004354 chez cette espèce.