Recherche et identification des enzymes de restitution de bactéries isolées des échantillons collectés dans les localités de Nkondengui et Omnisport de la ville de Yaoundé

Abstract

Les enzymes de restriction sont les molécules produites par les bactéries et constituent pour elles un mécanisme de défense contre les infections par les bactériophages. Ces enzymes ont pour rôle de digérer l’ADN en fonction des séquences nucléotidiques reconnues. Ce sont les outils utilisés dans le domaine des biotechnologies et pour manipuler l’ADN. Le présent travail a permis de rechercher et d’identifier les enzymes de restriction de type II des bactéries des échantillons collectés dans les quartiers Nkondengui et Omnisport de la ville de Yaoundé. Les échantillons de boue et d’eau sale ont été prélevés dans un marécage du quartier Nkondengui, Les échantillons de Terre et de sciure ont été prélevés respectivement aux alentours d’une maison abandonnée et dans une menuiserie et l’échantillon de feuilles mortes en décomposition dans un champ au quartier Omnisport. Ces échantillons ont été introduits dans les tubes eppendorf étiquetés, acheminés au laboratoire et conservés au congélateur. La culture des bactéries s’est faite sur milieu solide coulée dans les boites de pétrie et a ensuite servi à l’observation macroscopique des colonies. Cette observation a permis de distinguer les colonies en fonction de la taille, de la couleur et de la vitesse de la poussée. Ensuite les colonies de bactéries ont été cultivées dans le milieu liquide et à la lyse puis à la centrifugation. Les extraits obtenus après centrifugation ont été testés sur les ADN λ et ADN T7. Puis ces extraits ont été soumis à l’héparine sépharose pour obtenir un pic de digestion qui a été utilisé soit pour la réaction d’optimisation, ou de digestion complète. Au niveau de la culture en milieu solide, 25 colonies bactériennes différentes ont été identifiées. Parmi ces isolats, 6 ont présentés après les tests sur les ADN les activités de digestion des enzymes de restriction. Tandis que 19 n’ont pas présentés d’activités décelables après une analyse électro phorétique. Les profils de restriction obtenus des 6 isolats actifs ont été comparés à ceux déjà connus dans la littérature et ont été identifiés comme isoschizomère des enzymes suivantes : AflII ; AsuI ; HaeIII1 ; BstBI ; PstI et SnaBI. Ces enzymes présentent des séquences nucléotidiques de reconnaissance et des coupures et par conséquent digèrent facilement l’ADN et peuvent être utilisés en biotechnologie.